常見問題
1）為了保證檢測質(zhì)量，臨床PCR實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有充分合理的空間，良好的照明和空調(diào)設(shè)備。工作環(huán)境雖不是檢測質(zhì)量的直接原因，但寬敞舒適的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境將肯定有利于檢驗(yàn)質(zhì)量的保證。
2）合理有效地對儀器設(shè)備進(jìn)行管理，定期做維護(hù)和校準(zhǔn)，使其處于一個良好的狀態(tài)。例如，定期校準(zhǔn)移液器，使其保持足夠的準(zhǔn)確度和精密度。定期維護(hù)熒光定量PCR儀的光學(xué)系統(tǒng)和反應(yīng)孔間溫度差異，使其保持在良好狀態(tài)和允許的范圍內(nèi)。此外，還包括天平，離心機(jī)，冰箱等設(shè)備的管理。
3）理想的試劑：主要有內(nèi)外兩個因素，內(nèi)在因素包括標(biāo)本處理方法，用于核酸擴(kuò)增的原材料及方法學(xué)設(shè)計(jì)等。外出因素包括試劑盒的運(yùn)輸和保存中的問題。
4）標(biāo)準(zhǔn)化操作流程：完整的臨床PCR程序由標(biāo)本采集，運(yùn)送，保存，編號，試劑準(zhǔn)備，核酸提取，擴(kuò)增和產(chǎn)物檢測，結(jié)果分析和報(bào)告等諸多環(huán)節(jié)，建立科學(xué)和與本實(shí)驗(yàn)室配套的SOP文件，嚴(yán)格按SOP進(jìn)行操作。
5）主要污染源和防污染措施：PCR的主要污染源有標(biāo)本中的大量待測微生物，克隆質(zhì)粒，大量存在實(shí)驗(yàn)室中的特定微生物以及以前擴(kuò)增產(chǎn)物的殘留污染等。這些都是實(shí)驗(yàn)室最容易造成假陽性的污染。因此，必須嚴(yán)格分區(qū)實(shí)驗(yàn)室及遵守工作流程，使用化學(xué)清潔實(shí)驗(yàn)臺面，使用紫外線照射和UNG方法消除擴(kuò)增產(chǎn)物污染等等。
6）進(jìn)行室內(nèi)和室間質(zhì)量控制，室內(nèi)質(zhì)量控制可以確保實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)測定質(zhì)量的一致性，室間質(zhì)量控制可以提供將實(shí)驗(yàn)室測定情況與一室間和客觀標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行回顧性比較的數(shù)據(jù)。
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